تم تقدير فيتامين C باستخدام طريقة الباحث (Stanley, et al., 1979):

المبدأ الأساس : Basic principle

     إن حامض الاسكوربيك يتأكسد بواسطة النحاس ليكون ديهايدرو حامض الاسكوربيك dehydroascorbic acid وحامض ثنائي كيتوكلونيك  Diketogluonic acid وهذه النواتج تتفاعل مع 4-2 ثنائي فنيل هيدرازين لتكون مشتق بس-4-2 ثنائي نايتروفينل هيدرازون وهذا المركب بإضافة حامض الكبريتيك المركز تحصل له إعادة ترتيب ليكون ناتجاً يعطي حزمة امتصاصية عند الطول الموجي 520 nm إن التفاعل أعلاه يجرى بوجود الثايوريا الذي بواسطته يتم الحصول على وسط اختزال معتدل يعمل على منع التداخلات مع مواد أخرى .

تحضير الكواشف : Preparation of Reagents

-1 محلول 5% ، 10% ثلاثي كلورو حامض الخليك    (TCA)في الماء المقطر .

-2محلول 2-4 ثنائي نايترو فنيل هيدرازين/ثايوريا/نحاس (DTC) copper/Thiourea/2,4-dinitrophenylhydrazine يحضر بأخذ 3gm من 4-2 ثنائي نايترو فنيل هيدرازين ،   0.05gm كبريتات النحاس المائية CuSO₄.5H₂O و0.4gm من الثايوريا  أذيبت جميعا في    ( mL (100 من H₂SO₄ (9N) .

-3 محلول 65% حامض الكبريتيك .

طريقة العمل : Procedure

     يمزج في أنبوبة اختبار 0.5 mL من مصل الدم مع 0.5 mL من 10% TCA وتوضع في جهاز الطرد المركزي بسرعة 3500g ولمدة 20 دقيقة وذلك لترسيب البروتين . ثم تتم الإضافة كما هو موضح في الجدول الآتي :

يمزج المحلول جيدا ويترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 30دقيقة ثم تقاس شدة الامتصاص عند520nm  .

الحسابات  : Calculations

       تم تقدير تركيز فيتامين C في الدم باستخدام المنحني القياسي لفيتامين C الذي حضر بأخذ تراكيز مختلفة من محلول فيتامين C القياسي (2mg/100mL) تتراوح بين (20-0) µg/mL وتم استخدام محلول 5% TCA لتحضير المنحني القياسي.