يمكن الكشف عن الموقع الخلوي للعديد من الإنزيمات بواسطة المجهر حيث يتم تجميد النسيج بدرجة - 20م ثم الحصول على شرائح باستعمال أجهزة تقطيع Cryoatat ، يجب أن يكون النسيج صلب للحصول على شرائح رقيقة قطرها 10 ميكروميتر كلما كانت اقل يقل فقدان نشاط الإنزيم ويتم تثبيت الشرائح بواسطة الفورمالدهيد لمنع حدوث انتشار البروتينات كما يساعد الفورمالدهيد في أحداث ربط - تقاطعي بين المجاميع الأمينية في السلسلة الطرقية للبروتينات وتحتفظ معظم الإنزيمات ببعض من نشاطها بعد المعاملة السابقة إلا أن قسما منها يفقد نشاطه التحفيزي الذي يكشف عنهـا بـدون تثبيت وفي كلتا الحالتين يعامل مقطع النسيج مع محلول منظم الخليط ملون يحتوي على المادة الأساس للإنزيم المرغوبة دراسته وتحتاج عملية التلوين تحويل المادة الأساس إلى ناتج مناسب يفضل أن يكون الناتج غير متحرك بعد تكوينه لمنع انتشاره بعيدا عن موقع الإنزيم، فعلى سبيل المثال يحتوي محلول المادة الأساس لطريقة ملح الرصاص لتقدير نشاط الإنزيم Acid-phosphatase على بيتا - كلسيروفوسفيت وأيونات الرصاص لتكوين فوسفيت الرصاص في محلول منظم ذو أس هيدروجيني 5.5 يعمل إنزيم الفوسفاتيز الحامضي الموجود في النسيج على تحليل كلسيروفوسفيت.

glycerophosphate→ glycerate + Pi حيث يتفاعل الفوسفيت المتحرر مع أيونات الرصاص لتكوين فوسفيت الرصاص غير الذائبة مما يتحول إلى مركب غير ذائب باستعمال محلول كبريتيد الأمونيوم.

PbPO₄ + (NH₄)₂S→ PBS يمكن ملاحظة تكوين راسب اسود من كبريتيد الرصاص حيث يظهر الفوسفاتيز الحامضي العديد من الصبغات التي يكن ملاحظتها بوضوح بواسطة المجهر الضوئي والذي لا يمكن استخدام المجهر الإلكتروني لأن المكونات من الذرات لتلك الصبغات لا يكون أكثر عتمه للحزمة الإلكترونية من الذرات الموجودة في النسيج وتتمكن الذرات ذات الوزن الذري العالي من العناصر المعدنية الثقيلة من تشتيت حزمه الإلكترونات بكمية كافية مما يؤدي ذلك إلى أن يجعل موقع تلك الذرات أكثر عتمه من النسيج ولكن الاستفادة من طريقة ملح الرصاص في فحوصات المجهر الإلكتروني لان فوسفيت الرصاص معتم للإلكترونات مما تترسب في المناطق التي يوجد فيها إنزيم الفوسفاتيز الحامضي ولا يستفاد من المجهر الإلكتروني في تحويل فوسفيت الرصاص إلى كبريتيد الرصاص لان كليهما تسببان نفس العتمة للإلكترونات الشرائح الذي تستعمل في المجهر الإلكتروني يجب إن تكون رقيقة جدا بحدود 80 نانوميتر لذلك تكون المقاطع التي يتم تحضيرها وتلوينها كما ذكر سابقا يجب إزالة الماء منها عن طريق إحلال الكحول محل الماء.

مواضيع ذات صلة

الطرد المركزي

التقسيم الخلوي الثانوي للإنزيمات

تقدير المناعة الإشعاعية للإنزيمات

التقديرات الحركية المزدوجة coupled kinetic assays

تقدير حركية النشاط التحفيزي

التقدير الكمي لنشاط الإنزيم

تقدير الإنزيمات

اختيار المستحضر

isocitrate dehydrogenase

(Phosphofructokinase (PFKase

(Aspartate transcarbamoylase (AT Case

انزيم Phosphorylase