الغرض من تقدير نشاط الإنزيم هو التعرف على كمية الإنزيم ذو الصفات المعلومة الموجودة في مجنس النسيج أو في سائل ما أو في مستحضر نقي جزئيا وتستخدم أنواع مختلفة من القياسات الحركية السريرية والصناعية والتجريبية ومن أهم الاختبارات السريرية هي تقدير الإنزيمات في الدم لأن الظروف الذي تسبب تلف أنسجة معينه ناتج عن تحرير كميات كبيرة من الإنزيمات إلا أن تركيز الإنزيمات يقدر في عينات الأنسجة أو في الخلايا المزروعة وخاصة في حالة التشخيصات الوراثية الشاذة لا تزال من الناحية العملية تستخدم تحاليل رياضية الحركيات التقديرات الروتينية والذي تتضمن حضن عينه واحدة تحت ظروف ثابتة لتقليل تأثير تغيرات المادة الأساس والناتج عندما يكون الإنزيم في حالة نشاط واستخدام تركيز عالي من المادة الأساس، فعلى سبيل المثال لو بدأ التفاعل بتركيز مادة أساس هو 10 ثابت ميكليس وسمح ليست أكثر من 0,1 من الكمية أن تتحول إلى ناتج، فأن سرعة التفاعل الإنزيمي تقل حوالي %1% خلال التقدير عندما لا يتأثر الناتج فأن المادة الأساس تقل من 10 إلى 9 ثابت ميكليس والسرعة الأولية من 0,91 إلى 0,90 من السرعة القصوى ونصف كمية الإنزيم في العينة يكون %1 من نصف كمية المنتوج في وقت معين تحت نفس الظروف أي أن كمية الناتج تتناسب طرديا مع كمية الإنزيم في العينة لذلك يجب أن تكون هناك طرق تحليلية حساسة لناتج التفاعل أو اخذ خطوات لإزالة الناتج المتكون بأسرع ما مكن لذلك من المفضل عند تقدير الإنزيم إضافة زيادة من إنزيم آخر لتحفيز التفاعل الإضافي لناتج التفاعل أو إضافة بعض الكواشف الذي تتفاعل اختياريا مع الناتج وتحوله إلى مركب آخر زمن الممكن استخدام الإنزيم لتحليل تركيز المركبات في العينة حتى عندما لا يوجد هناك توازن.

نلاحظ بأن NADH تملك peak absorption للضوء في طول موجي 340 نانوميتر بينما لا يحدث ذلك في NAD لذلك فأن التفاعل لا يمكن تتبعه عند انخفاض الامتصاص للضوء في هذا الطول الموجي والتغير في الامتصاصية يمكن تتبعه خلال فترات زمنية لتقدير الإنزيم أو زيادة الإنزيم يمكن أضافتها إلى عينه مجهولة وتتبع التفاعل حتى الاكتمال لقياس كمية البيروفيت في العينة التفاعل لا يمكن أن يستخدم لتقدير اللاكتيت لان التوازن لا يكون لصالح تكوين البيروفيت، إلا أن التقدير يصبح ممكن عندما يضاف الهيدرازين في خليط التفاعل لإزالة البيروفيت مما يجعل التوازن الكلي لصالح أكسدة اللاكتيت ولما كانت التغيرات الحاصلة بسبب التحلل الذاتي والدنترة تزداد مع مرور وقت الخزن لذلك يجب أجراء التقديرات على الفعالية للإنزيمات بأسرع وقت ممكن وإذا لم يتم التحلل يجب حفظ العينة بدرجات حرارية منخفضة جدا - 60م للحد من فقدان نشاط الإنزيم إلا أن تجميد النسيج قد يزيد من تشقق الخلايا .

مواضيع ذات صلة

الطرد المركزي

كيمياء أنسجة الإنزيمات enzyme histochemistry

التقسيم الخلوي الثانوي للإنزيمات

تقدير المناعة الإشعاعية للإنزيمات

التقديرات الحركية المزدوجة coupled kinetic assays

تقدير حركية النشاط التحفيزي

التقدير الكمي لنشاط الإنزيم

اختيار المستحضر

isocitrate dehydrogenase

(Phosphofructokinase (PFKase

(Aspartate transcarbamoylase (AT Case

انزيم Phosphorylase