يمكن تقدير نشاط الإنزيم في محلول معين أو مستخلص الأنسجة ولا جل تقدير نشاط الإنزيم من الضروري معرفة

1. معادلة التفاعل المحفز.

2. الطريقة التحليلية لتقدير اختفاء المادة الأساس أو ظهور نواتج التفاعل.

3. هل الإنزيم يحتاج إلى عوامل مرافقة مثل الأيونات المعدنية أو المرافقات الإنزيمية

4. اعتماد نشاط الإنزيم على تركيز المادة الأساس مثل ثابت ميكليس - منتن للمادة الأساس.

5. الأس الهيدروجيني الأمثل للتفاعل الإنزيمي.

6. درجة الحرارة الذي يكون فيها الإنزيم ثابت ويلك أعلى نشاط.

أي في أي أس هيدروجيني امثل وفي أي تركيز للمادة الأساس أو في أي درجة حرارة مناسبة لنشاط الإنزيم والذي غالبا ما تكون بين 25 إلى 38م مع تركيز مادة أساس قريب من التشبع ، تحت تلك الظروف، فأن سرعة التفاعل الأولية تتناسب مع تركيز الإنزيم حيث تكون سرعة التفاعل الأولية هي رتبة - صفر zero-order)) للمادة الأساس أما في الحالات التي يحتاج فيها الإنزيم إلى عوامل مرافقة مثل الأيونات المعدنية والمرافقات الإنزيمية فأن العوامل المرافقة يجب أن تضاف في تركيز يؤدي إلى الإشباع لذلك يكون تركيز الإنزيم هو عامل تحديد السرعة rate limiting factor في النظام أي تركيز عال من المادة الأساس وتركيز واطئ من ناتج التفاعل مع درجة مناسبة من الحرارة والآس الهيدروجيني، إن قياس سرعة تكوين ناتج التفاعل أكثر دقة من قياس اختفاء المادة الأساس لأن المادة الأساس موجودة بتركيز مرتفع نسبيا للحفاظ على الرتبة - صفر ويقاس ناتج التفاعل بطرق طيفية كيمياوية معينه والطرق الطيفية اكثر فائدة لأنها تعطي قياسات مستمرة للتفاعل وقد عرفت المنظمة العالمية للكيمياء وحدة واحدة من نشاط الإنزيم بأنها تلك الكمية الذي تسبب تحويل واحد ميكرومول من المادة الأساس لكل دقيقة بدرجة 25 م تحت الظروف المثلي للقياس، فالنشاط النوعي هو عدد الوحدات الإنزيية لكل مليغرام من البروتين والنشاط النوعي هو قياس نقاوة الإنزيم الذي يزداد خلال التنقية للإنزيم ويصبح في الحد الأقصى ويكون ثابت عندما يكون الإنزيم بحالة نقية عدد الانقلاب أو التحول للإنزيم هو العدد من جزيئات المادة الأساس المتحولة لكل وحدة وقت بواسطة إنزيم منفرد أو واسطة موقع فعال منفرد عندما الإنزيم يكون في حالة عامل تحديد السرعة (جدول-22) ويعتبر carbonic any rase من الإنزيمات المهمة الموجودة بتركيز مرتفع في كريات الدم الحمراء وهو من أكثر الإنزيمات فعالية مع رقم تحول 36000000 لكل دقيقة لكل جزيئة إنزيم وهو يحفز إضافة الماء إلى ثاني اوكسيد الكربون لتكوين حامض الكربونيك والذي تعتبر خطوة مهمة في نقل ثاني اوكسيد الكربون من الأنسجة إلى الرئة حيث يتم تحريره وبواسطة تطبيق طرق التقدير الكمية لمعرفة نشاط الإنزيم في أجزاء البروتينات المعزولة بواسطة طرق مختلفة مثل مجال الهجرة الكهربائية. 

جدول (22) أرقام التحويل في بعض الإنزيمات

وتستخدم بعض الأحيان وحدة بودانسكي Bodansky واحدة من نشاط الإنزيم للفوسفاتيز هي كمية الإنزيم المحفز لتكوين ملغم واحد من الفسفور على شكل فوسفيت غير عضوي في 100مل من المصل خلال ساعة واحدة تحت ظروف معينه من الحامضية ودرجة الحرارة ويمكن الاستفادة من امتصاص الضوء عند طول موجي 330 نانوميتر عند استعمال المرافقات الإنزيمية NADH ,NADPH وليست NAD⁺,NADP⁺ حيث عند تغير NADH إلى NAD⁺ وبالعكس تتغير الكثافة الضوئية عند طول موجي 340 نانوميتر حيث يتناسب معدل تغير الكثافة الضوئية تحت ظروف معينه طرديا مع نشاط الإنزيم لذلك يمكن تعريف وحدة الإنزيم لأي إنزيم نازع للهيدروجين بالتغيير الحاصل في الكثافة الضوئية مقدار 0,001 عند طول موجي 340 نانوميتر خلال دقيقة واحدة.

مواضيع ذات صلة

الطرد المركزي

كيمياء أنسجة الإنزيمات enzyme histochemistry

التقسيم الخلوي الثانوي للإنزيمات

تقدير المناعة الإشعاعية للإنزيمات

التقديرات الحركية المزدوجة coupled kinetic assays

تقدير حركية النشاط التحفيزي

تقدير الإنزيمات

اختيار المستحضر

isocitrate dehydrogenase

(Phosphofructokinase (PFKase

(Aspartate transcarbamoylase (AT Case

انزيم Phosphorylase