تنقى البروتينات المدمجة المأشوبة بالاستشراب بالألفة

بالإضافة إلى تأمينها لمصدر غني للإنزيمات يسهل الحصول على الشكل النقي منها، تستخدم تقنية الدنا (DNA) المأشوب لتكوين بروتينات محورة يعكن تنقيتها بواسطة الاستشراب بالألفة (Affinity). ولتحقيق ذلك نقوم بربط مجموعة من النوكليوتيدات ترمز بمجموعها للواحق (Extensions) بروتينية إلى سلسلة نوكليوتيدات اكين الأصلي فيتشكل ما يسمى البروتين المدمج (Fusion protein) الذي يعتبر لجيناً نوعيا لداعم خاص يستخدم في تقنية الاستشراب بالألفة. إحدى الطرق الشائعة لتحقيق ذلك تتضمن ربط 5-6 ممالات هيستيدين أو ربط الحقل الرابط. للركيزة (Substrate-binding domain) لناقلة سلفهدريل الجلوتاثيون (Glutathione S-transferase) إلى النهاية الكربوكسيلية أو الأمينية للسلسلة الببتيدية للإنزيم المدروس. يعكن بعد ذلك تنقية هذا البروتين المدمج المأشوب بتطبيقه على عمود ثبتت إليه أيونات ثنايية التكافؤ كالنيكل (+Ni2) في حال دمج الهيستيدينات) أو الجلوتاثيون (في حال دمج الحقل الرابط للركيزة لناقلة سلفهدريل الجلوتاثيون) (الشكل 8-6). هذا ومن الممكن أن تؤدي عملية الدمج إلى إقحام موقع نوعي لأحد إنزيمات البروتياز النوعية جدا كالثرومبين في المنطقة التي تربط بين جزيين من البروتين المدمج مما يسمح بنزع الحقل المضاف لاحقا بعد التنقية بالألفة.

مواضيع ذات صلة

الطرد المركزي

كيمياء أنسجة الإنزيمات enzyme histochemistry

التقسيم الخلوي الثانوي للإنزيمات

تقدير المناعة الإشعاعية للإنزيمات

التقديرات الحركية المزدوجة coupled kinetic assays

تقدير حركية النشاط التحفيزي

التقدير الكمي لنشاط الإنزيم

تقدير الإنزيمات

اختيار المستحضر

isocitrate dehydrogenase

(Phosphofructokinase (PFKase

(Aspartate transcarbamoylase (AT Case