طرق الكشف عن السلالات الفايروسية

ليس من السهولة عادة الكشف عن سلالات النوع الفايروسي خصوصا في ظل تداخل الأعراض التي تسببها على عوائلها النباتية إلا أن من أهم المؤشرات الحقلية على وجود أكثر من سلاله لنوع فايروسي معين هي تباين الأعراض التي تظهر على النبات العائل وظهور أعراض غير معتادة عليه تختلف عن الأعراض النمطية لذلك الفايروس وتتوفر للباحثين العديد من الطرق لغرض الكشف عن سلالات الفايروس المعني أو ظهور سلالة جديدة وفيما يلي وصفا لهذه الطرق.

1. الكشف بدراسة الخواص الكيماوية الفايروسية

تتباين سلالات النوع الفايروسي في نسبة الحامض النووي وخصائص البروتين واستنادا لذلك فإن الكشف عن وجود فروقات في التعاقب النيوكليوتايدي للجينوم وفي تعاقب الاحماض الأمينية للكابسيد عن السلالة الأبوية النمطية إنما يدل على وجود أكثر من سلالة لذلك الفايروس، إلا أن هذه الدراسات تحتاج إلى أجهزة معقدة عالية الحساسية وخبرة بشرية لغرض الكشف عن الفروقات الطفيفة في مكونات الحامض النووي والبروتين الفايروسي.

2. الكشف بالطرق المصلية

توظف العديد من الطرق المصلية وخاصة اختبارات الاليزا والبصمة المناعية للنسيج النباتي باستعمال الأضداد وحيدة النسيلة المتخصصة على سلالات معينة دون غيرها، كما يعطي اختبار الانتشار المزدوج في الأكار دليلا واضحا على وجود أكثر من سلالة في النبات في حالة وجودها.

3. الكشف باختبارات ثباتية الفايروس

يمكن الكشف عن سلالات بأجراء اختبارات الثباتية وهي اختبارات الخواص الفيزيائية للفايروس في العصير الخام للنبات المصاب حيث يمكن لهذه الاختبارات أن تعطي مؤشرا على وجود أكثر من سلالة وذلك استنادا على حقيقة أن سلالات النوع الفايروسي تتباين في درجة تحملها للحرارة والتخفيف ومدة التعمير وبالتالي فان الكشف عن وجود تباين في قيم هذه الصفات عن القيمة المعتادة للسلالة النمطية للفايروس يعني وجود أكثر من سلالة.

4. الكشف باختبار التفاعل المتسلسل للبوليميريز PCR

يعد هذا الاختبار أحد أهم وأدق الطرق المستعملة حاليا للكشف عن السلالات بسبب قدرته العالية في الكشف عن التباين في التعاقب النيوكليوتايدي لجينومات السلالات الفايروسية حيث يستعمل اختبار PCR العادي للكشف عن سلالات الفايروسات ذات الجينوم من نوع الدنا فيما يستعمل اختبار RT-PCR للكشف عن سلالات الفايروسات ذات الجينوم من نوع الرنا.

5. الكشف بدراسة المقاومة المتبادلة

يمكن توظيف هذه الظاهرة والتي تعرف أيضا بظاهرة "التداخل" Interference في الكشف عن وجود السلالات حيث أن ظهورها في النبات المصاب يدل على وجود أكثر من سلالة للفايروس المعني.

6. الكشف بدراسة الأعراض

إن الملاحظة الدقيقة للأعراض التي يسببها الفايروس على النباتات تعطي دليلا على وجود السلالات وذلك بسبب تباين الأعراض التي تسببها السلالات العائدة للنوع الفايروسي على النوع النباتي العائل، حيث أن ظهور أعراض غير معتادة على النبات يدل على إصابته بأكثر من سلالة ومثال ذلك ظهور بقع مصفرة جهازية مصاحبة لأعراض الموزائيك. إلا أن أكثر الأعراض استعمالا للكشف عن السلالات وفصلها هي أعراض البقع الموضعية التي تظهر على النباتات الكاشفة حيث لا تشترك أكثر من سلالة في بقعة موضعية واحدة على الورقة وبالتالي فان كل بقعة موضعية يسببها الفايروس على ورقة النبات تمثل سلالة نقية (نسيلة) للفايروس المعني.

7. الكشف باستعمال الناقلات

تعد الناقلات وسيلة مفيدة في الكشف عن السلالات وفصلها عند وجودها في إصابة

خليطة لنبات فرد واحد وتستند هذه الطريقة على حقيقة تباين سلالات بعض أنواع الفايروسات في علاقتها مع الناقلات نتيجة التخصص العالي لبعض الناقلات على مستوى السلالة الفايروسية حيث يختلف نوع الناقل المتخصص لنقل كل سلالة وبالتالي فانه يمكن لهذا الناقل من فصل السلالة المعنية من النبات ويترك الأخرى، إلا أن هذه الظاهرة لا تحصل إلا مع عدد محدود من الفايروسات ومن أهمها فايروس التقزم الاصفر للشعير (BYDV) حيث أن لكل سلالة من سلالاته نوعها الناقل المتخصص من حشرات المن، كذلك وجدت عدد من الحالات التي لا تنقل فيها سلالة معينة للفايروس نهائيا بأي نوع من الناقلات التي تنقل بقية سلالات ذلك الفايروس وهذا ما لوحظ مع السلالة PVY^c لفايروس البطاطا واي (PVY) التي لا تنقل نهائيا بأي نوع من حشرات المن الناقلة بكفاءة لبقية سلالات هذا الفايروس.

8. دراسة الشكل الظاهري للجسيمات

يتم ذلك باستعمال المجهر الالكتروني لملاحظة الفروق الطفيفة في الشكل الظاهري لجسيمات سلالات النوع الفايروسي إن وجدت وتعد هذه الدراسة غالبا محدودة الفائدة في الكشف عن السلالات وذلك لصعوبة تمييز الفروقات المظهرية بين سلالات النوع الفايروسي وخصوصا في الأبعاد حيث نادرا ما يكون هذا الفرق واضحا أو محسوسا.