تقدير فعالية إنزيم كلوتاميت-اوكزالواستيت ترانس امينيز في مصل الدم |
201
08:19 صباحاً
التاريخ: 2024-08-27
|
أقرأ أيضاً
التاريخ: 29-11-2015
2057
التاريخ: 2024-03-05
635
التاريخ: 1-6-2017
1624
التاريخ: 2024-03-24
538
|
المبدأ الاساسي Basic Principle
تم تقدير فعالية إنزيم كلوتاميت-اوكزالواستيت ترانس امينيز باستخدام طريقة إنزيمية تعتمد على قياس تركيز البايروفيت هيدرازون المتكون من تفاعل البايروفيت مع 2،4 - ثنائي نايتروفنيل هيدرازين المضاف ، اذ ان الاوكزالواستيت (Oxaloacetate) الناتج من عملية انتقال مجموعة الامين (Transamination) بوجود إنزيم الـ (GOT) يفقد مجموعة الكاربوكسيل ويتحول إلى البايروفيت.(1)
الكواشف Reagents
-1 المحلول المنظم GOT Buffer :- يحتوي على الفوسفات المنظم (Phosphate buffer) بتركيز mmolL (100) عند دالة حامضية قدرها (pH=7.4) ، والاسبارتيت (L-aspartate) بتركيز (100) mmolL ويحتوي ايضاً على الفا-كيتوكلوتاريت (α-ketoglutarate) بتركيز (2) mmolL والمحلول جاهز للاستخدام ويبقى مستقرا عند خزنه بدرجة ° C (2-8).
-2 محلول -2,4 ثنائي نايتروفنيل هيدرازين (2,4 -Dinitro phenylhydrazine ) بتركيز mmolL (2) ، ويكون جاهزاً للاستخدام ومستقر عند خزنه بدرجة ° C (2-8) .
-3 محلول هيدروكسيد الصوديوم (Sodium hydroxide):- بتركيزmolL (4) ، يخفف محتوى علبة واحدة من الكاشف بالماء المقطر إلى ml (1000) .
طريقة العمل Procedure
يضاف ml (0.1) من الماء المقطر ومصل الدم الى انابيب اختبار تحتوي mL (0.5) من المحلول المنظم مع الرج . وتوضع الأنابيب في الحمام المائي بدرجة حرارة °c (37) ولمدة (30) دقيقة ، وبعدها يضاف لكل انبوبة ml (0.5) من المحلول 2,4 - ثنائي نايتروفنيل هيدرازين وترج الأنابيب وتترك بدرجة حرارة °C 20)-(25 ولمدة (20) دقيقة . ثم يضاف لكل أنبوبة ml (5) من محلول هيدروكسيد الصوديوم . وتمزج وتترك لمدة (5) دقائق بعد ذلك تقرأ الامتصاصية عند طول موجي قدره nm (546) .
الحسابات Calculations
يتم الحصول على فعالية إنزيم الـ GOT من الشكل الاتي :-
------------------------------------------------------
1. Reitman S., and Frankel S. (1957)," A calorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic acid and glutamic pyruvic transaminases " , J. Clin. Path. 28:56.
|
|
5 علامات تحذيرية قد تدل على "مشكل خطير" في الكبد
|
|
|
|
|
لحماية التراث الوطني.. العتبة العباسية تعلن عن ترميم أكثر من 200 وثيقة خلال عام 2024
|
|
|