أقرأ أيضاً
التاريخ: 13-2-2017
1931
التاريخ: 2024-03-09
690
التاريخ: 2024-05-06
651
التاريخ: 13-6-2017
1917
|
المبدأ الاساسي Basic Principle
استخدمت في تقدير فعالية إنزيم الفوسفاتيز القاعدي طريقية إنزيمية , والتي تتضمن اضافة فوسفات الفنيل (Phenyl phosphate) وهي المادة الاساس (Substrate) التي يعمل عليها إنزيم الفوسفاتيز القاعدي في مصل الدم ويحضن التفاعل لمدة ربع ساعة في درجة حرارة (37) °C درجة مئوية ويعمل الإنزيم على تحويل فوسفات الفنيل إلى الفينول (Phenol) الذي يمكن الكشف عنه وتقديره كمياً وذلك باضافة المحلول 4- امينوانتي بايرين (4-amino-antipyrin) وبوجود Alkaline potassium ferricyanide والذي يكون معقداً احمر اللون يعرف بالكينون والذي يمكن قراءة الامتصاصية له عند طول موجي nm (510) .(1)
الكواشف Reagents
-1 محلول مادة الاساس المنظم Substrate Buffer Solution :- يحتوي على فوسفات الفنيل الثنائية الصوديوم (Disodium phenylphosphate) بتركيز (5) mmolL مع محلـــــول (Carbonate - bicarbonate) بتركيزmmolL (50) وفي دالة حامضية (pH=10).
-2 المحلول القياسي Standard Reagent :- يحتوي على الفينول (phenol) ويكافئ (20) وحدة كايند-كنك .
-3 المحـلول المثبط BLoking Reagent :- يحتوي على 4- امينو انتــي بايريـــــن (4-amino-antipyrine) بتركيزmmolL (60) بالاضافة لاحتوائه على ارسينات الصوديوم (Sodium arsenate) بتركيز gL (75) .
-4 المحلول الملون dye Reagent :- يحتوي على سيانيد البوتاسيوم الحديديكي (Potassium ferricyanide) بتركيز mmolL (150) .
طريقة العمل Procedure
تم وضع في ثلاثة انابيب اختبار ml (2) من المادة الاساس , ووضعت الانابيب في الحمام المائي بدرجة °C (37) لمدة (5) دقائق ، ثم أضيف µL (50) من المحلول القياسي ومصل الدم والماء المقطر واعيدت الانابيب إلى الحمام المائي وبدرجة الحرارة نفسها ولمدة (15) دقيقة ، ثم أضيف إليها (0.5) ml من المحلول المثبط وتمزج جيداً ويضاف بعدها ml(0.5) من المحلول الملون . ووضعت جميع الانابيب في مكان مظلم ولمدة (10) دقائق بعدها سجلت الامتصاصية للعينات عند طول موجي قدره nm (510) مقابل المحلول الكفء .
الحسابات Calculations
تم حساب فعالية إنزيم الفوسفاتيز القاعدي بوحدة كايندكنك (Kind and King) وحسب العلاقة الاتية :
وحدة كايندكنك (Kind and King) : وهي الوحدة التي تحرر mg (2) من الفينول خلال (15) دقيقة تحت ظروف التفاعل من درجة حرارة °c (37) ودالة حامضية (pH= 10-9.6) .
يتم قياس النتيجة بلوحدة الدولية 1UL = النتيجة بوحدة كايندكنك (Kind and King) 7.09 X
-----------------------------------------------------
1. Belfield A. and Goldberg D. M. (1971)," Revised assay for serum phenylphosphatase activity using 4-amino-antipyrine, Enzyme", 12: 561-573.
|
|
دراسة يابانية لتقليل مخاطر أمراض المواليد منخفضي الوزن
|
|
|
|
|
اكتشاف أكبر مرجان في العالم قبالة سواحل جزر سليمان
|
|
|
|
|
اتحاد كليات الطب الملكية البريطانية يشيد بالمستوى العلمي لطلبة جامعة العميد وبيئتها التعليمية
|
|
|