اتبعت طريقة Bauer وجماعته^[1] وهي طريقة انتشار المادة في الاكار (Agar) من خلال قرص حاوٍ على هذه المادة اذ ينقع كل قرص في محلول المركب تحت الدراسة وبتركيز 200 ملغم/مل في مذيب ثنائي مثيل سلفوكسايد (DMSO) وبعد ذلك تختبر فعالية المركبات المحضرة واستخدمت هذه الطريقة لسهولتها وللاقتصاد في الوسط الغذائي المستعمل Nawas^[2]، اذ نقلت (4-5) مستعمرات نقية للانواع الاربعة من البكتريا: Escherichia coli و Staphylococcus aureus و Proteus mirabilis و Klebsiella pneumoniae الى وسط المرق المغذي، وحضن الوسط بدرجة حرارة (37 °م) لمدة 24 ساعة. خفف بعد ذلك بالمحلول الملحي (Normal saline) وذلك بالمقارنة مع انبوب السيطرة القياسي الذي يعادل (10⁸ خلية/سم³) ثم نقل (0.1) سم³ من العالق الجرثومي المخفف الى وسط الاكار المغذي الاعتيادي (Nutrient agar) ونشر على سطح الطبق باستعمال مسحة قطنية معقمة
(Sterile cotton swabs) . تركت الاطباق بدرجة حرارة (37 °م) لمدة (30) دقيقة لحصول عملية التشرب. ولاجل دراسة تأثير المركبات المحضرة على نمو الجراثيم فقد تم تحضير اقراص من ورق الترشيح (Whatmann No. 1) بقطر (6) ملم المعقمة والمشبعة بتراكيز مختلفة (200 و 100 و 50 و 25 و 12.5) ملغم/مل من محاليل المركبات المراد دراستها وذلك باضافة (0.1) سم³ من مذيب (DMSO) المذاب فيه وزن معين من المركب قيد الدراسة الى قنينة حاوية على (10) اقراص معقمة وتوزع الاقراص بوساطة ملقط معقم على سطح الاكار وتحضن الاطباق عند درجة حرارة (37 °م) لمدة (24) ساعة. واعتمدت فترة التحضين المثلى للنمو بالاعتماد على منحني النمو القياسي. استخدمت طريقة Presscot وجماعته^[3] لبيان حساسية المركبات المدروسة التي تعتمد على قطر حزم التثبيط. وقد تم استخدام المضاد الحيوي من نوع Vancomycin للجراثيم الموجبة لصبغة كرام أي انها استخدمت لجرثومة Staphylococcus aureus . أما المضاد الحيوي Gentamicin فقد استخدم للجراثيم السالبة لصبغة كرام أي انها استخدمت للجراثيم من نوع Escherichia coli و Klebsiella pneumoniae و Proteus mirabilis بالاعتماد على ما يستخدم في مختبر الصحة العامة والمعتمد على فحوصات منظمة الصحة العالمية^[4].

--------------------------------------------------------------------------

1- A.W. Bauer, W.A.M. Kirby, J.S. Sherris and M. Turk, (1966), “Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method”, Am. J. Clin. Pathol., 45, 493-496.

2- T.E. Nawas, S. Mawajden, A. Dabned and A. Al-Omari, (1994), “Vitro activities of antimicrobial agents against proteusspp”, Clinical Speciments. Br. J. Biomed Sci., 51, 2, 95-99.

3- L.M. Prescott, J.P. Harley and D.A. Klein, (1996), “Microbiology”, 3rd Ed., Wm.C. Brown Publisher, London, Chicago, pp. 436-450.

4- J. Vandepitte, K. Engback, P. Pito and G. Heuk, (1991), “Basic Laboratory Procedure in Clinical Bacteriology”, World Health Organisation, Geneva, pp. 78-85.