1- المبدأ    Principle

تم استخدام طريقة العالمين كايند وكنك (Kind and King, 1954) لتقدير فعالية إنزيم (ALP) باستخدام محاليل قياسية منتجة من شركة (Bio Merieux) الفرنسية المحتوية على فوسفات الفنيل وهي المادة الأساس التي يعمل عليها إنزيم (ALP)، حيث تتضمن الطريقة إضافة فوسفات الفنيل إلى مصل الدم وبتوفير الظروف المثلى لعمل الإنزيم فأنه يقوم بتحويل المادة الأساس إلى الفينول وفقاً  للمعادلة الآتية :-

يمكن تقدير الفينول المتحرر بإضافة محلولγ -امينوانتي بايرين ومحلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي والذي يكون مركباً معقداً احمر اللون يعرف بالكينون وهو ذو شدة تتناسب طردياً مع فعالية الإنزيم وممكن توضيح هذا التفاعل بالمعادلة :-

2 - تحضير الكواشف  Preparation of Reagents

1. الكاشف الأول

محلول الكاربونات المنظم (pH=10) (carbonate- bicarbonate buffer) بتركيز(50 mmole/l) 

محلول المادة الأساس ويحتوي على فوسفات الفنيل ثنائية الصوديوم   (disodiumphenyl phosphate) بتركيز (5mmole/ l)  تمزج حجوم متكافئة من المحلول المنظم مع محلول المادة الأساس لتكوين الكاشف الأول.

2. محلول الفينول القياسي

يتكون من محلول الفينول بتركيز (20KIND and KING γ /100 ml) 

3. محلول γ-امينو انتي بايرين (U-Amino antipyrine) بتركيز (60 mmole/ l) محلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي (Potassium fericyanide) بتركيز            (150 mmole/ l). 

3.4.2- طريقة العمل    Procedure

1. محلول الاختبار Test Solution

تم وضع (2) مليلتر من الكاشف الأول في أنبوبة اختبار، ثم وضعت في حمام مائي بدرجة (37°م) مئوية لمدة خمس دقائق ثم أضيف إليها (50) مايكرولتر من مصل الدم، ورجت الأنبوبة جيداً ثم وضعت في الحمام المائي بنفس الدرجة السابقة لمدة (15) دقيقة بعدها يضاف (0.5) مليلتر من محلول U-امينوانتي بايرين لإيقاف التفاعل الإنزيمي ويرج جيداً ثم يضاف (0.5) مليلتر من محلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي.

2. المحلول الضابط   Control Solution

تم وضع (2) مليلتر من الكاشف الأول في أنبوبة اختبار ثم وضعت في حمام مائي بدرجة (37°م) لمدة (20) دقيقة بعدها يضاف (0.5) مليلتر من محلول        U-امينوانتي بايرين ويرج جيداً ثم أضيف (0.5) مليلتر من محلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي و (50) مايكرولتر من مصل الدم.

3. المحلول القياسي  Standard Solution  

تم وضع (2) مليلتر من الكاشف الأول في أنبوبة اختبار ثم وضعت في حمام مائي بدرجة (37°م) لمدة خمس دقائق ثم أضيف إليها (50) مايكرولتر من محلو الفينول القياسي ثم وضعت في حمام مائي عند درجة (37°م) لمدة ربع ساعة وبعد رفعها من الحمام المائي أضفنا (0.5) مليلتر من محلولγ -امينوانتي بايرين ثم يضاف (0.5) مليلتر من محلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي.

4. المحلول الكفء  Blank Solution 

تم وضع (2) مليلتر من الكاشف الأول في أنبوبة اختبار ثم وضعت في حمام مائي بدرجة (37°م) مئوية لمدة خمس دقائق ثم أضيف إليها (0.5) مليلتر من محلول γ-امينوانتي بايرين ثم يضاف (0.5) مليلتر من محلول سيانيد البوتاسيوم الحديديكي.

بعدها رجت الأنابيب الأربعة جيداً فتكون محلول وردي يميل إلى الاحمرار ذو شدة تتناسب طردياً مع تركيز الإنزيم في مصل الدم وتم قياس شدة اللون بجهاز المطياف الضوئي عند طول موجي قدره (510 nm) نانومتر بعد ترك الأنابيب لمدة (10) دقائق في الظلام.

4.4.2- الحسابات  Calculations                                                                 

تحسب فعالية الإنزيم بوحدات الكنك ارمسترونك (K.A.U)

  (العمري، 1986) .PH= 10- 9.6

تعريف الوحدة :- وهي الوحدة التي تحرر (1) ملغم من الفينول خلال (15) دقيقة تحت ظروف التفاعل من درجة حرارة (37°م)  ودالة حامضية (