تحضير البيئات اللازمة لتحميل الأكاروسات

من المعروف أن الدراسات التصنيفية والمورفولوجية تحتاج إلى دراسة الصفات المختلفة للكائنات ولما كانت الأكاروسات حيوانات صغيرة الحجم لا ترى بالعين المجردة بسهولة - لذلك لا يتأتى دراستها مورفولوجيا إلا بتحميلها على شرائح زجاجية لفحصها تحت الميكروسكوب وتستعمل لذلك محاليل خاصة يطلق عليها أوساط  Mounting mediaأو محاليل التحميل Mounting solution التحميل وعليه فهناك العديد من الطرق التي تصلح لتحميل الأكاروسات المختلفة وحيث أن التحضيرات الميكروسكوبية يجب أن تكون ذات شفافية عالية لذلك يجب إزالة العضلات والأنسجة وهذا لا يتأتى إلا باستخدام محاليل مروقه التي تعمل على تفتيت وتأكل الأنسجة الداخلية دون الضرر بالهيكل الخارجي للأكاروس ولهذا يمكن استخدام المحاليل المروقه كتحضيرات غير مستديمة أو مؤقتة وبالرغم من صلاحية التحميلات المؤقتة إلا إنه لا يمكن بواسطتها حفظ العينات إلا لمدة قصيرة مما يترتب علية عدم إمكانية عمل مجموعة من الشرائح المستديمة.

أولا: التحضيرات المؤقتة Temporary preparations

يمكن عمل تحضيرات مؤقتة باستخدام المحاليل المروقه Clearing agents كما يمكن استخدامها للترويق قبل التحميل المستديم وهذه المحاليل هي:

1-حامض اللاكتيك Lactic acid

حيث أوضح Grandjean أهمية حمض اللاكتيك في تحميل الأكاروسات يعمل على ترويقها وإظهار تراكيبها وأتضح صلاحيته لمعظم أنواع الأكاروسات ما عدا أفراد فوق فصيلة الأكاروس الدودي.

2- محلول نسبت Nesbitt's fluid

يعتبر محلول نسبت من المحاليل المروقة القوية وينصح باستخدامه في حالة الأكاروسات المحفوظة في الكحول ويتركب من الاتي:

أيدرات الكلورال Chloral hydrate 40 جرام

ماء مقطر Distilled water 25 سم

حامض الايدروكلوريك المركز Concentrated hydrochloric acid 2.5 سم

ثانيا: التحضيرات المستديمة أو الشبة مستديمة

Permanent or semipermanent preparations

تستخدم في هذه الحالة محاليل مائية بدون استخدام المحاليل المثبتة المعروفة والتحميل في كندا بلسم إلا أن أحد عيوبها امتصاص الماء من الحيز المحيط مما يؤثر على ثبات موضع الأكاروس على الشريحة ولتفادي ذلك يمكن إحاطة مكان التصاق حواف غطاء الشريحة بمادة لاصقة لا تذوب في الماء مثل طلاء الأظافر Gold size - Zut - Nail polish ومن هذه المحاليل محلول برليزي Berlese medium وفور Faur's ويعتبر الأخير تعديل لمحلول برليزي المستخدم فيه الصمغ وأيدرات الكلورال. أهم هذه التحضيرات ما يلي:

1- محلول برليزي المشتمل على الصمغ والكلورال Berlese's fluid gumchloral

يتركب هذا المحلول من الاتي:

ماء مقطر Distilled water                      20 سم

أيدرات الكلورال Chloral hydrate             16 جرام

صمغ عربي Gum Arabic                       15 جرام

جليسرين Glycerin                                10 جرام

حامض الخليك الثلجي Glacial acetic acid   5 جرام

ولتجهيزه يذاب الصمغ في الماء ثم تضاف المواد الباقية وتسخن تسخينا بسيطا ثم يرشح المحلول خلال شاش الموسلين داخل قمع ساخن أو بواسطة قمع بخنر ويستخدم هذا المحلول في تحميل أكاروسات عديمة الثغر Astigmata.

2- محلول هوير Hoyer's medium

يتركب هذا المحلول من الاتي:

ماء مقطر Distilled water              50 سم

صمغ عربي Gum Arabic               30 جرام

أيدرات الكلورال Chloral hydrate     200 جرام

جليسرين Glycerin                        20 سم

تخلط المواد السابقة بالترتيب الموضح سابقا مع التأكد من إذابة المواد الصلبة تماما ثم يرشح المحلول خلال قماش الموسلين حتى يتخلص من الشوائب الموجودة بالصمغ العربي ويجب ملاحظة عدم استخدام الصمغ العربي المطحون وذلك لصعوبة إذابة جزيئاته الصغيرة حيث يبقي الكثير منها جافا مما يؤدي إلى تلف التحميل – كما يمكن تحميل الأكاروسات المحفوظة في الكحول في محلول هوير مباشرة ويجب الأخذ في الاعتبار أن التحميل بهذه الطريقة لا يكون مستديما لمدة طويلة بل يمكن إعادة التحميل بوضع الشريحة في ماء دافئ واعادة تحميل الأكاروس في محلول هوير جديد - إلا أن استخدام حلقة من المادة اللاصق المذكورة سابقا حول غطاء الشريحة يساعد على بقاء التحميل لمدة أطول.

3- محاليل كيفر Keifer's fluid

أستخدم كيفر Keifer عام 1952هذه المحاليل للتحميلات المستديمة للحلم الدودي وفيها يمرر الأكاروس خلال ثلاثة محاليل أ، ب، ج وتتكون هذه المحاليل الثلاثة من الاتي:

أ- محلول أ

بودرة صمغ عربي Gum arabic                                1 جرام

بللورات روزورسينول Rozorsenaul crystals             3 جرام

بللورات يودور البوتاسيوم Uodor Potassium crystals  0.2 جرام

بللورات يود lodine crystals                                   0.20-0.32 جرام

وتطحن هذه المواد في هون صيني وتنقل إلى زجاجة حيث يضاف إليها الاتي:

حامض اللاكتيك Lactic acid                            10سم

حامض الايدروكلوريك Hydrochloric acid          8 نقطة

ويرج المحلول جيدا ليتم الامتزاج.

ب- محلول ب

سكر (سكروز) Sugar                                     1 جرام

إيدرات الكلورال Chloral hydrate                     8 جرام

يودور البوتاسيوم Uodor Potassium crystals    0.2 جرام

بللورات يود lodine crystals                           0.32 جرام

وتصحن هذه المواد في هون صيني ثم تنقل إلى زجاجة ويضاف إليها الاتي:

محلول فورمالدهید (0.5 القوة العادية) 30 نقطة

ويرج المحلول جيدا ليتم الامتزاج.

ج- محلول ج

صمغ عربي Gum Arabic                       0.5 جرام

سكر (سكروز) Sugar                             0.5 جرام

إيدرات الكلورال Chloral hydrate             7 جرام

يودور البوتاسيوم                                      0.2 جرام

وتصحن هذه المواد في هون صيني ثم تنقل إلى زجاجة ويضاف إليها الاتي:

محلول فورمالدهید (0.25 القوة العادية) 18 نقطة

ويرج المحلول بعد ذلك جيدا ليتم الامتزاج.