المرجع الالكتروني للمعلوماتية
المرجع الألكتروني للمعلوماتية

علم الاحياء
عدد المواضيع في هذا القسم 10456 موضوعاً
النبات
الحيوان
الأحياء المجهرية
علم الأمراض
التقانة الإحيائية
التقنية الحياتية النانوية
علم الأجنة
الأحياء الجزيئي
علم وظائف الأعضاء
المضادات الحيوية

Untitled Document
أبحث عن شيء أخر
غزوة الحديبية والهدنة بين النبي وقريش
2024-11-01
بعد الحديبية افتروا على النبي « صلى الله عليه وآله » أنه سحر
2024-11-01
المستغفرون بالاسحار
2024-11-01
المرابطة في انتظار الفرج
2024-11-01
النضوج الجنسي للماشية sexual maturity
2024-11-01
المخرجون من ديارهم في سبيل الله
2024-11-01


Affinity chromatography  
  
1184   01:44 مساءاً   date: 17-4-2016
Author : Clive Dennison
Book or Source : A guide to protein isolation
Page and Part :


Read More
Date: 20-4-2016 2364
Date: 17-4-2016 1324
Date: 20-4-2016 2692

Affinity chromatography

 

The chromatographic methods discussed above are all  dependent upon the  gross  physicochemical  properties  of  the  protein.  However,  the biological  activity  of the  protein  is  generally  more  subtle  and  depends upon  the  very  specific,  complementary,  steric  relationship  between  the active site and a substrate (or inhibitor),  or a binding site  and a ligand, as the  case  may  be.  Affinity  chromatography  exploits  this  biospecific relationship  between a protein  and a  ligand,  to  specifically  select  out  a desired protein from a crude mixture, essentially in a single step.

The specific ligand, which in the case of an enzyme may be a substrate or an inhibitor, is immobilized by conjugation to an insoluble matrix,  in a manner  which does  not  interfere  with  its  interaction  with  the  protein.

This  may  require the  use of a spacer arm,  which typically  consists  of  a chain of about 6-10  carbon  atoms.  An affinity  chromatography  resin is thus  comprised  of  three  parts,  i)  the  matrix,  which  is  similar  to  the matrices used for ion-exchange chromatography, ii) a spacer arm,  and iii) the ligand.  Matrix/spacer arm combinations  are commercially  available, since these  are universal reagents,  and simply  require the  addition  of an appropriate ligand.

The sample  solution  is passed through the  column and by its specific interaction with the immobilized ligand the protein of interest is  retained, while all other  proteins  pass straight through  the  column.  Subsequently, the  protein  can  be eluted by a change  in  either  the  pH  or  ionic  strength of the buffer or by addition of a free  competing  ligand,  or of a chaotrope. Because the protein is immobilized in a small volume of resin,  affinity columns are generally quite small.  Also, the volume  of solution  in  which the  protein  occurs  may  be  large  and  to  pass  this  volume  through  the column in a reasonable time, while maintaining the linear flow rate within limits, the  column is usually relatively  wide (e.g.  1.5 x  1.5  mm i.d.).  To overcome  the  problem  of  excessive  volumes,  there  may  be  some advantage in preceding affinity chromatography by a quick  concentrating method, such as TPP.

 

References

-Dennison, C. (2002). A guide to protein isolation . School of Molecular mid Cellular Biosciences, University of Natal . Kluwer Academic Publishers new york, Boston, Dordrecht, London, Moscow .

 




علم الأحياء المجهرية هو العلم الذي يختص بدراسة الأحياء الدقيقة من حيث الحجم والتي لا يمكن مشاهدتها بالعين المجرَّدة. اذ يتعامل مع الأشكال المجهرية من حيث طرق تكاثرها، ووظائف أجزائها ومكوناتها المختلفة، دورها في الطبيعة، والعلاقة المفيدة أو الضارة مع الكائنات الحية - ومنها الإنسان بشكل خاص - كما يدرس استعمالات هذه الكائنات في الصناعة والعلم. وتنقسم هذه الكائنات الدقيقة إلى: بكتيريا وفيروسات وفطريات وطفيليات.



يقوم علم الأحياء الجزيئي بدراسة الأحياء على المستوى الجزيئي، لذلك فهو يتداخل مع كلا من علم الأحياء والكيمياء وبشكل خاص مع علم الكيمياء الحيوية وعلم الوراثة في عدة مناطق وتخصصات. يهتم علم الاحياء الجزيئي بدراسة مختلف العلاقات المتبادلة بين كافة الأنظمة الخلوية وبخاصة العلاقات بين الدنا (DNA) والرنا (RNA) وعملية تصنيع البروتينات إضافة إلى آليات تنظيم هذه العملية وكافة العمليات الحيوية.



علم الوراثة هو أحد فروع علوم الحياة الحديثة الذي يبحث في أسباب التشابه والاختلاف في صفات الأجيال المتعاقبة من الأفراد التي ترتبط فيما بينها بصلة عضوية معينة كما يبحث فيما يؤدي اليه تلك الأسباب من نتائج مع إعطاء تفسير للمسببات ونتائجها. وعلى هذا الأساس فإن دراسة هذا العلم تتطلب الماماً واسعاً وقاعدة راسخة عميقة في شتى مجالات علوم الحياة كعلم الخلية وعلم الهيأة وعلم الأجنة وعلم البيئة والتصنيف والزراعة والطب وعلم البكتريا.